’S e innleachd deasachaidh genome treas ginealach a th’ ann an ath-aithrisean palindromic goirid eadar-spàsaichte gu cunbhalach (CRISPR) a tha air an saoghal a rèabhlaideachadh leis na toraidhean àrd-toraidh aige. Chaidh a chleachdadh gus diofar ghalaran agus ghalaran bith-eòlasach a làimhseachadh. Tha siostaman CRISPR/Cas9 aig diofar bacteria agus prokaryotes eile (leithid archaea) cuideachd gus dìon an aghaidh phages. Chaidh aithris gun urrainn do ro-innleachdan stèidhichte air CRISPR/Cas9 casg a chuir air fàs agus adhartas aillse broilleach trì-àicheil (TNBC) le bhith ag amas air ginean strì, tar-sgrìobhadh agus riaghladh epigenetic a dh’ fhaodadh a bhith air an atharrachadh. Faodaidh na h-eadar-theachdan leigheasach seo cuideachadh le bhith a’ dèiligeadh ri duilgheadasan dùbhlanach leithid strì an aghaidh dhrogaichean a chithear eadhon ann an TNBC. An-dràsta, thathas a’ cleachdadh diofar dhòighean gus CRISPR/Cas9 a lìbhrigeadh gu ceallan targaid, leithid corporra (microinjection, electroporation agus modhan hydrodynamic), bhìorasach (bhìoras co-cheangailte ri adeno agus lentivirus) agus neo-bhìorasach (liposomes agus nanoparticles lipid). Ged a chaidh diofar mhodalan a leasachadh gus sgrùdadh a dhèanamh air adhbharan moileciuil TNBC, tha dìth dhòighean mothachail is cuimsichte airson innealan deasachaidh genome a lìbhrigeadh in vivo a’ cuingealachadh an cleachdadh clionaigeach. Mar gheàrr-chunntas, tha an lèirmheas seo a’ sgrùdadh gu coileanta adhartas, dùbhlain, crìochan, agus cothroman làimhseachaidh CRISPR/Cas9 airson TNBC stèidhichte air fianais a th’ ann mar-thà. Bidh sinn cuideachd a’ soilleireachadh mar as urrainn don mheasgachadh de dh’fhiosrachadh fuadain agus ionnsachadh innealan ro-innleachdan CRISPR/Cas9 a leasachadh ann an làimhseachadh TNBC.
Tha aillse air a chomharrachadh le roinneadh cealla gun smachd, briseadh air puingean-sgrùdaidh cearcall cealla, agus mùthaidhean ann an ginean casg tumhair (TSGn) (Matthews et al., 2022). Am measg nan diofar sheòrsaichean aillse, is e aillse broilleach an seòrsa aillse as cumanta ann am boireannaich agus tha ìre bàsmhorachd àrd aige air feadh an t-saoghail (Waks agus Winer, 2019). Tha aillse broilleach na ghalar eadar-mheasgte le feartan eadar-mheasgte, leithid feartan histologach agus bith-eòlasach, taisbeanadh clionaigeach agus giùlan, agus freagairt do làimhseachadh (Weigelt et al., 2010). Tha seòrsachadh aillse broilleach a’ toirt seachad lèirsinn mhionaideach airson breithneachadh aillse broilleach agus prognosis tumhair. Tha cleachdadh chomharran bith-eòlasach cumanta agus feartan clionaigeach-pathologach air a bhith mar am prìomh shlat-tomhais airson seòrsachadh aillse broilleach (Tsang agus Tse, 2019). Tha grunn nithean a’ toirt buaidh air prognosis agus freagairt do làimhseachadh aillse broilleach, a’ gabhail a-steach làthaireachd gabhadair estrogen (ER), gabhadair progesterone (PR), gabhadair factar fàis epidermal daonna 2 (HER2/neu), agus ìre histologach, seòrsa tumhair, agus ìre. meud agus metastasis nód lymph (Al-Tubaiti, 2020). Chaidh còig fo-sheòrsan moileciuil intreach de aillse broilleach a chomharrachadh, nam measg luminal A, luminal B, HER2-enriched, basal-like, agus claudin-low (Prat et al., 2015). Tha TNBC na fho-sheòrsa moileciuil de aillse nach eil a’ cur an cèill a h-uile ER, PR, agus HER2 (Yin et al., 2020). Tha na feartan pathological seo co-cheangailte ri TNBC, a’ dearbhadh a adhartas luath agus nàdar nas ionnsaigheach na seòrsa sam bith eile de aillse broilleach (Feng et al., 2018). A bharrachd air an sin, chleachd Peru et al (2000) teicneòlas microarray gus aillse broilleach ath-sheòrsachadh agus còig fo-sheòrsan intreach de aillse broilleach a chomharrachadh (Cadenas, 2012). Tha aillse broilleach coltach ri basal na fho-sheòrsa de aillse broilleach aig a bheil phenotype trì-àicheil agus a tha co-cheangailte ri adhartas luath. Bu chòir a thoirt fa-near gu bheil a h-uile aillse broilleach coltach ri basal air a dhearbhadh gu ceàrr mar TNBC, ach chan eil ach 77% dhiubh TNBC; An coimeas ri sin, tha 71–91% de TNBC coltach ri basal, a’ nochdadh gu bheil an dà sheòrsa aillse broilleach seo a’ dol thairis air a chèile agus a’ riochdachadh diofar sheòrsachadh (Wang D.-Y. et al., 2019). Tha seo a’ cruthachadh feum air neo-chunbhalachd TNBC a chomharrachadh gus prognosis a shoilleireachadh agus freagairtean a dh’ fhaodadh a bhith ann do leigheasan gnàthach is san àm ri teachd a chomharrachadh. A bharrachd air an sin, tha TNBC a’ dèanamh suas 15–20% de chùisean aillse broilleach agus tha e nas cumanta ann am boireannaich fo aois 50 bliadhna. Chaidh aithris air mùthaidhean BRCA1 no BRCA2 ann an timcheall air 20% de chùisean TNBC (Xie et al., 2017; Tzikas et al., 2017, 2020). Tha sgrùdaidhean air sealltainn cuideachd gu bheil meanbh-àrainneachd dìonachd sònraichte aig TNBC anns a bheil ìrean àrda de fhactaran fàis endothelial vascular, macrophages co-cheangailte ri tumhair (TAMan), lymphocytes a tha a’ dol a-steach do tumhair (TILan), agus moileciuilean eile a tha an sàs ann am fàs agus imrich tumhair. Mar sin, tha tuigse air meanbh-àrainneachd TNBC deatamach airson a ro-innse agus a làimhseachadh (Fan agus He, 2022).
Gus measadh a dhèanamh air ro-innse TNBC agus dèanamh cinnteach à làimhseachadh èifeachdach, tha breithneachadh ceart, stèidhichte sa mhòr-chuid air immunohistochemistry (IHC) gus ER, PR agus HER2 a lorg, agus mammography gus neoplasms broilleach a lorg, cudromach. Ach, chan urrainn dha mammography feartan intratumoral leithid necrosis agus fibrosis a nochdadh gu leòr (Deepak Singh et al., 2021). Leis gu bheil droch ro-innse agus breithneachadh a’ cur casg air dotairean bho bhith a’ òrdachadh nan cungaidhean ceart (Chaudhary, 2020), thathas a’ cleachdadh diofar ro-innleachdan gus cùram a leasachadh dha euslaintich le TNBC. An-dràsta, thathas a’ cleachdadh dà dhroga, doxorubicin agus cyclophosphamide, ann an euslaintich le TNBC agus tha iad air deagh thoraidhean a nochdadh. A bharrachd air an sin, thathas a’ cleachdadh drogaichean platanam eile, leithid carboplatin agus cisplatin (Sikov et al., 2015). A bharrachd air an sin, chaidh luchd-bacadh PARP leithid Olaparib, Velaparib, agus PF-01367338 a chleachdadh mar dhrogaichean chemotherapy a dh’fhaodadh a bhith ann airson làimhseachadh TNBC (Ishino et al., 2018). Bho chaidh aithris gu bheil slighean comharran Wnt/b-Catenin, NOTCH, agus Hedgehog an sàs ann an tachairt agus adhartas TNBC, is dòcha gur e ro-innleachd chudromach a th’ ann a bhith a’ targaideadh dhrogaichean dha na slighean sin (Aysola et al., 2013). Ged a tha lannsaireachd, leigheas rèididheachd agus chemotherapy fhathast mar phrìomh dhòigh làimhseachaidh airson TNBC an-diugh, chaidh adhartas mòr a dhèanamh ann a bhith a’ leasachadh leigheasan ùra a’ gabhail a-steach leigheas targaideach, immunotherapy, diofar innealan deasachaidh gine co-cheangailte ri CRISPR leithid Cas9n, dCas9, CRISPR/Cas12, prìomh deasachadh, agus leigheas gine targaideach CRISPR/Cas9. An seo, cuiridh sinn fòcas air diofar innealan deasachaidh gine co-cheangailte ri CRISPR a thathas a’ cleachdadh ann an làimhseachadh TNBC. Nam measg, tha CRISPR/Cas9 air aire fharsaing fhaighinn.
'S e Cas9n, ris an canar cuideachd nickase Cas9, caochladh innleadaichte gu ginteil den phròtain Cas9 a tha air a thoirt bhon t-siostam deasachaidh genome CRISPR/Cas9 (Gupta et al., 2019). Anns a' chruth thùsail aige, tha dà raon niùclasaidh anns a' phròtain Cas9: RuvC agus HNH, agus is e am prìomh dhleastanas aca sgoltadh an dà shreath DNA. Ach, ann an Cas9n, tha aon de na raointean niùclasaidh, HNH, air a mhùthadh gu ginteil agus a' fàs neo-ghnìomhach. Mar sin, tha raon HNH Cas9n fhathast neo-ghnìomhach. Chan eil ach raon RuvC fhathast gnìomhach, a' leigeil le Cas9n briseadh a ghearradh no a chruthachadh air sreathan DNA singilte (Trevino agus Zhang, 2014). An coimeas ri Cas9, faodaidh Cas9n buaidhean far-targaid a lughdachadh gu h-èifeachdach agus dòighean càraidh cealla a leasachadh gu ceart. Faodar Cas9n a chleachdadh gus diofar dhuilgheadasan fhuasgladh, leithid briseadh a chruthachadh aig àiteachan sònraichte ann an DNA dà-shreangach. Airson an adhbhair seo, chaidh dà mholacilean Cas9n a chur còmhla agus an cleachdadh còmhla (Yee, 2016). 'S e kinase pròtain mitogen-gnìomhaichte a th' ann an kinase measgaichte loidhne 3 (MLK3) a bhios na phrìomh riaghlaiche rè metastasis TNBC (Cronan et al., 2012).
Faodaidh MLK3 iomadh slighe chomharran a ghnìomhachadh a tha a’ leantainn gu metastasis TNBC. Mar eisimpleir, bidh slighe kinase N-terminal c-Jun (JNK) a’ riaghladh gluasad cealla agus crìonadh maitrís taobh a-muigh cealla, agus bidh MLK3 a’ gnìomhachadh slighe JNK, agus mar sin a’ neartachadh gluasad cealla agus a’ toirt feartan ionnsaigheach dha (Rattanasinchai agus Gallo, 2016). Bidh MLK3 cuideachd a’ riaghladh EMT. Gus seo a dhèanamh, bidh e a’ gnìomhachadh factaran tar-sgrìobhaidh sìos an abhainn leithid Snail, Slug agus Twist. Bidh na factaran sin a’ cur bacadh air abairt chomharran epithelial agus a’ brosnachadh abairt chomharran mesenchymal, a’ leantainn gu bhith a’ faighinn phenotype metastatic (Casalino et al., 2023). Chaidh fhaicinn gu bheil pàirt aig MLK3 ann an ath-dhealbhadh ECM agus gnìomhachadh proteases leithid matrix metalloproteinases (MMPs) a bhios a’ crìonadh an ECM. Bidh seo a’ comasachadh ionnsaigh cealla tumhair agus sgaoileadh gu làraichean fad às (Katari et al., 2019). Mar sin, tha sgrùdaidhean roimhe air sealltainn gu bheil pàirt chudromach aig MLK3 ann an TNBC. Chleachd Rattanasinchai agus Gallo modalan TNBC gus sgrùdadh a dhèanamh air àite MLK3 agus fhuair iad a-mach gu bheil e a’ brosnachadh leasachadh aillse tro shlighean comharran sònraichte. Chleachd iad CRISPR/Cas9n gus MLK3 a dheasachadh agus mhothaich iad lùghdachadh mòr ann an sgaoileadh TNBC (Rattanasinchai agus Gallo, 2016).
'S e cruth atharraichte den phròtain Cas9 a th' ann an dCas9, ris an canar gu tric Cas9 neo-ghnìomhach. Eu-coltach ri Cas9 gnìomhach, chan eil gnìomhachd endonuclease aig dCas9, agus mar sin chan urrainn dha briseadh dà-shreath DNA adhbhrachadh. Mar sin, faodar dCas9 a chleachdadh gus roinnean sònraichte den genome a tharganachadh gu mionaideach gun atharrachaidhean no mùthaidhean sam bith air sreath an DNA (Wang et al., 2016). Ann an dCas9, tha dà phròtain endonuclease, RuvC agus HNH, air an neo-ghnìomhachadh le bhith a’ cur bacadh air fuigheallan amino-aigéid cudromach. (Richter et al., 2016). A dh’ aindeoin dìth gnìomhachd sgoltadh DNA, tha dCas9 a’ cluich grunn dhleastanasan cudromach ann an rannsachadh ginteil agus bith-theicneòlas. Mar eisimpleir, leigidh e le bhith a’ faicinn roinnean sònraichte den genome, a’ comasachadh riaghladh tar-sgrìobhaidh, agus a’ brosnachadh atharrachaidhean epigenetic (Brocken et al., 2018).
Tha pàirt shònraichte agus chudromach aig an fhactar tar-sgrìobhaidh ZEB1 (zinc finger E-box connecting homeobox 1) ann a bhith a’ meadhanachadh gluasad epithelial-mesenchymal (EMT), pròiseas ceallach a thachras rè leasachadh embryonic, càradh clò, agus adhartas aillse. Tha e a’ toirt a-steach cruth-atharrachadh cheallan epithelial gu ceallan mesenchymal, agus mar thoradh air sin bidh atharrachaidhean ann am morf-eòlas cealla, gluasaid, ionnsaigheachd, msaa. (Wu et al., 2020). Bidh ZEB1 a’ cur bacadh air grunn chomharran epithelial, leithid E-cadherin agus Occludin, a tha an urra ri bhith a’ cumail suas greamachadh cealla-ri-cealla agus polarity cheallan epithelial ann an TNBC (Moreno-Bueno et al., 2008). A bharrachd air an sin, bidh ZEB1 a’ gnìomhachadh comharran sònraichte leithid N-cadherin, vimentin agus fibronectin (Konradi et al., 2014) agus cuideachd a’ riaghladh ginean a tha an sàs ann an ath-dhealbhadh cytoskeletal leithid Rho GTPases agus matrix metalloproteinases (MMPs) (Huang). et al., 2014). 2022), a bharrachd air an sin, bidh e cuideachd a’ toirt buaidh air diofar shlighean comharran leithid factar fàis atharrachail-β (TGF-β), comharran Wnt, msaa., agus mar sin a’ brosnachadh ionnsaigh tumhair agus metastasis ann an TNBC (Chen et al., 2016). Tha grunn sgrùdaidhean agus fianais saidheansail a’ nochdadh gu bheil comas mòr aig ZEB1 mar àidseant luachmhor airson lorg agus eadar-theachd leigheasach TNBC. Ann an sgrùdadh o chionn ghoirid, chleachd Waryah et al. modail TNBC agus choilean iad casg iomlan air ZEB1 le dCas9. Mar sin, chunnaic iad sònrachas glè àrd agus casg cha mhòr iomlan air ZEB1 ann an suidheachaidhean in vivo (Waryah et al., 2023).
’S e inneal deasachaidh gine a th’ ann an CRISPR/Cpf1 ris an canar CRISPR/Cpf1. Tha e a’ tighinn bhon t-siostam CRISPR/Cas, far a bheil an teirm Cas12 a’ toirt iomradh air pròtain 12 co-cheangailte ri CRISPR (Bharathkumar et al., 2022), a tha gu tur coltach ri Cas9. Is e an aon eadar-dhealachadh gu bheil am pròtain Cas12 ann. An coimeas ri Cas9, tha cuid de dhleastanasan sònraichte aig Cas12 leithid cinn steigeach a chruthachadh rè a’ phròiseas deasachaidh gine, ach bidh Cas9 a’ gineadh cinn maol (Wang et al., 2021). Tha an togalach seo aig Cas12 a’ cur ris an teicneòlas làimhseachaidh DNA sònraichte aige. Mar phròtain comasach air DNA targaid aithneachadh agus a ghearradh gu mionaideach, tha ioma-chruthachd iongantach aige, ga dhèanamh na inneal èifeachdach airson grunn thagraidhean, a’ gabhail a-steach deasachadh gine (Pickar-Oliver agus Gersbach, 2019).
Coltach ri caochlaidhean CRISPR eile, tha CRISPR/Cas12 cuideachd comasach air ginean ann an TNBC a bhualadh a-mach no a ghnìomhachadh, ag amas air ginean a tha a’ cluich pàirt chudromach na pathogenesis no freagairt do làimhseachadh (Yang agus Zhang, 2023). Gus am pròiseas seo a choileanadh, chaidh RNA treòrachaidh (gRNA) a leasachadh a bhios a’ stiùireadh Cas12 chun ghine targaid. Cho luath ‘s a cheanglas Cas12 ris an targaid aige, bidh e a’ toirt a-steach briseadh dà-shreath ann an DNA agus a’ gnìomhachadh uidheaman càraidh DNA. Rè a’ phròiseis càraidh, faodar niùclasaidean ceàrr a thoirt a-steach, ag adhbhrachadh mùthaidhean gine agus call gnìomh (Zhang et al., 2021a). A bharrachd air an sin, chaidh dreach leasaichte den enzyme Cas12 (ris an canar dCas12) a chleachdadh cuideachd gus ginean a ghnìomhachadh. Le bhith ga chur còmhla ri gnìomhaiche tar-sgrìobhaidh, tha e comasach ginean sònraichte a bhrosnachadh, agus mar sin gan gnìomhachadh. Tha comas mòr aig an teicneòlas seo ann a bhith a’ brosnachadh gnìomhachadh ginean casg tumhair (Sultan et al., 2022).
’S e teicneòlas deasachaidh genome ùr-leasaichte agus air leth adhartach a th’ ann am prìomh dheasachadh. Tha e comasach dha DNA organsaigh atharrachadh gu mionaideach (Chen agus Liu, 2023). Bithear a’ coileanadh prìomh dheasachadh tro bhith a’ toirt a-steach dà phrìomh phàirt: einnsein CRISPR/Cas9 atharraichte agus transcriptase cùil. Is e dreuchd an einnsein CRISPR/Cas9 làraichean mionaideach anns a’ ghineamh a tharganachadh gu roghnach, agus bidh transcriptase cùil a’ cuideachadh le bhith ag atharrachadh an DNA gu mionaideach aig an àite targaid (Hassan et al., 2021). Anns an dòigh-obrach deasachaidh prìomhaire, tha a’ chiad cheum a’ toirt a-steach cruthachadh RNA treòrachaidh deasachaidh prìomhaire (pegRNA) (Standage-Beier et al., 2021). Tha an t-sreath targaid agus an teamplaid RNA a tha a’ freagairt ris an làrach deasachaidh a tha thu ag iarraidh anns an DNA targaid ann. Tha am pegRNA an uairsin air a thoirt a-steach do cheallan targaid còmhla ri niùclas deasachaidh prìomhaire (PE2). ’S e pròtain co-thàthaichte a th’ ann am PE2 anns a bheil einnsein Cas9, transcriptase cùil, agus inneal-atharrachaidh deasachaidh prìomhaire (Martín-Alonso et al., 2021). Taobh a-staigh na cealla, bidh co-thàthaidhean pegRNA agus PE2 a’ lorg an DNA sònraichte a tha iad airson atharrachadh. Bidh an einnsein Cas9 a’ gearradh DNA agus a’ cruthachadh teamplaid anns a bheil aon shreath (Choi et al., 2022). Bidh an transcriptase cùil a’ cleachdadh an teamplaid seo gus an DNA ullachadh airson deasachadh. Còmhla ri bhith a’ dèanamh lethbhreac de DNA, tha stiùireadh airson an teamplaid RNA a dheasachadh cuideachd air an toirt a-steach. Mu dheireadh, thathas a’ cleachdadh an t-sreang DNA a chaidh a chruthachadh às ùr mar theamplaid gus am briseadh anns an DNA a chàradh, agus mar thoradh air sin bidh sreath DNA atharraichte anns a bheil am modh-atharrachadh a tha thu ag iarraidh (Ochoa-Sanchez et al., 2021). Faodaidh dòighean deasachaidh prìomhaire leantainn gu mùthaidhean farsaing ann an ginean. Faodaidh e targaid a dhèanamh air mùthaidhean puing, cuir a-steach, cuir às, agus eadhon ath-chur ginean (Anzalone et al., 2019; Chen agus Liu, 2023). Tha grunn bhuannachdan aig deasachadh prìomhaire thairis air teicneòlasan deasachaidh genome roimhe. Tha iad sin a’ toirt a-steach cruinneas nas motha, buaidhean nas lugha far-targaid, agus a’ chomas DNA a dheasachadh gun a bhith an urra ri briseadh dà-sreang DNA (Anzalone et al., 2020).
Chaidh teicneòlas CRISPR/Cas9 a leasachadh an toiseach gus bacteria a dhìon bho ghluasad plasmid agus galar phage agus chaidh ath-chleachdadh nas fhaide air adhart mar inneal targaid DNA stèidhichte air RNA èifeachdach airson deasachadh genome (Jiang agus Doudna, 2017). A bharrachd air an sin, chaidh aithris gu bheil an siostam CRISPR/Cas9 an làthair ann an 50% agus 87% de genomes bacterial agus archaeal, fa leth (Ishino et al., 2018). Tha CRISPR/Cas9 na inneal comasach airson cuir às, cuir a-steach agus ceartachadh sreath ginteil neo-àbhaisteach sam bith a’ cleachdadh modhan in vivo agus in vitro (Sabit et al., 2021). A bharrachd air an sin, chaidh sealltainn gu bheil CRISPR/Cas9 nam pàirt den t-siostam dìon atharrachail air sgàth cho sònraichte ‘s a tha e do ghinean targaid inntinneach (Chen agus Zhang, 2018).
Tha CRISPR/Cas9 air a dhèanamh suas de Cas9 agus aon RNA treòrachaidh (sgRNA). Tha Cas9 na endonuclease air a dhèanamh suas de iomadh pàirt pròtain. A bharrachd air an sin, tha feartan structarail agus co-dhealbhach sònraichte aig Cas9 (Pacesa et al., 2022) leis gu bheil e air a dhèanamh suas de dhà lobe: aithneachadh (REC) agus niùclas (NUC). Tha lobe an REC air a roinn tuilleadh ann an trì roinnean: REC1, REC2, agus helices drochaid (Cromwell et al., 2018). Tha an NUC air a dhèanamh suas de thrì lobes, is iad sin RuvC (RuvC I, RuvC II, RuvC III), HNH agus an raon eadar-obrachaidh protospacer adjacent motif (PAM) (Figear 1) (Song et al., 2016). Tha sgRNA air a dhèanamh suas de dhà phàirt, a’ gabhail a-steach CRISPR RNA (crRNA) agus transcoding beag RNA (tracer RNA) (Figear 1). Bidh an sgRNA a’ ceangal a’ phròtain Cas9 ri connexins gus co-thàthadh gnìomhach a chruthachadh, ris an canar cuideachd an co-thàthadh effector (Richter et al., 2012). Tha crRNA na phàir bonn 18–20 nucleotide a tha a’ cluich pàirt chudromach ann a bhith ag aithneachadh sreathan DNA targaid. A bharrachd air an sin, bidh crRNA a’ paidhreachadh leis an DNA targaid, agus bidh tracrRNA ag obair mar sgafaill airson niùclas Cas9 gus an DNA targaid a cheangal (Manghwar et al., 2019). Air an làimh eile, tha 3 niùclasaidean aig an t-sreath PAM, a tha a’ dearbhadh, a’ sònrachadh agus a’ meadhanachadh ceangal a’ cho-thàthaidh effector ri DNA. Tha gnìomhachd catalaíseach aig fo-aonadan co-thàthadh pròtain Cas9 RuvC agus HNH (Richter et al., 2012; Asmamaw agus Zawdie, 2021). Bidh raon niùclas HNH den fho-aonad Cas9 a’ sgoltadh an t-sreang DNA co-cheangailte ris an crRNA. Bidh àrainn niùclasach RuvC a’ sgoltadh dualan DNA eile agus a’ gineadh briseadh-dùbailte-sreang (DSBn), agus às dèidh sin thèid dà dhòigh-obrach càraidh briseadh DNA eadar-dhealaichte a ghnìomhachadh (Jiang agus Doudna, 2017) (Figear 1).
Figear 1. Sealladh farsaing air CRISPR/Cas9 (A). Pàirtean den t-siostam CRISPR/Cas9: (i). Tha endonuclease Cas9 an urra ri bhith a’ gearradh sreath DNA an targaid, (ii) RNA treòrachaidh singilte (sg) mar thoradh air co-aonadh chimeras crRNA agus tra-crRNA. (dhà). Tha grunn phàirtean ann an Cas9 leithid Rec I, Rec II, lobe NUC (tha HNH agus Ruv C nan fo-phàirtean) agus raon eadar-obrachaidh PAM (C) le gnìomhan co-fhreagarrach. Bidh an co-thàthadh pròtain CRISPR/Cas9 a’ sgoltadh sreathan DNA ann an cruthan neo-cho-phàirteach agus co-phàirteach (D). Bidh CRISPR/Cas9 a’ deasachadh a’ ghineam ann an trì ìrean: aithneachadh, gearradh agus càradh. Bidh an sg-RNA dealbhaichte a’ stiùireadh Cas9 agus ag aithneachadh an t-sreath a tha thu ag iarraidh tron phàirt co-phàirteach crRNA. Bidh Cas9 ag aithneachadh sreath PAM aig 5′-NGG-3′ agus a’ leaghadh an DNA, a’ cruthachadh hibrid DNA-RNA agus a’ cur an sgoltadh an gnìomh. Bidh fearann HNH Cas9 a’ sgoltadh an t-snàthainn cho-phàirteach, agus bidh fearann RuvC a’ sgoltadh an t-snàthainn neo-cho-phàirteach. Bidh CRISPR/Cas9 a’ càradh dsDNA le bhith ga bhriseadh ann an dà dhòigh: ceangal deireadh neo-cho-phàirteach (NHEJ) agus càradh co-phàirteach (HDR). Bidh NHEJ a’ càradh DNA dà-snàthainn nuair nach eil DNA co-phàirteach cèin ann tro phròiseas einsímeach, dòigh-obrach a tha buailteach do mhearachdan as urrainn sreathan DNA air thuaiream a chuir a-steach no a thoirt air falbh. Tha HDR gu math sònraichte agus feumaidh e teamplaidean DNA co-phàirteach.
Tha slighean càraidh air an stiùireadh le CRISPR/Cas9 a’ toirt a-steach uidheaman neo-cho-chothromach deireadh-aonaidh (NHEJ) agus càraidh air a stiùireadh le co-chothromachd (HDR). Tha NHEJ na shlighe buailteach do mhearachdan oir tha e a’ toirt a-steach cuir a-steach no cuir às agus chan fheum e pàtran sam bith rè an uidheam càraidh. Bidh e a’ cleachdadh niùclasaidean air thuaiream gus pròtainean àbhaisteach a chruthachadh (Abbasi et al., 2021). Tha an siostam càraidh seo air a dhèanamh suas de cheithir cho-thàthaidhean leithid an co-thàthadh KU, an co-thàthadh pròtain seòrsa 4 a tha a’ co-chur thar-chrìochan (XRCC-4), an einnsein giullachd deireadh DNA, agus an kinase pròtain DNA-PKcs (Abbasi et al., 2021). Tha dà fho-aonad aig a’ phròtain iom-fhillte KU, Ku 70 agus Ku 80, agus tha pàirt chudromach aige ann am meacanism NHEJ, leis gu bheil am meacanism càraidh air a thòiseachadh le ceangal dà fho-aonad (Ku 70 agus Ku 80) ri cinn maol no cha mhòr maol an DNA targaid (Abbasi et al., 2021), a’ frithealadh mar sgafaill gus factaran eile co-cheangailte ri NHEJ fhastadh chun làrach leòn (Yang et al., 2020). Tha XRCC-4 agus DNA ligase air an dèanamh suas de 334 agus 911 amino-aigéid, fa leth, agus tha an co-fhillte XRCC4-DNA ligase IV a’ brosnachadh ceangal cinn DNA (Chatterjee et al., 2015). Tha einnsein giullachd deireadh DNA, ris an canar cuideachd polynucleotide kinase 3′-phosphate, na einnsein giullachd deireadh DNA. Faodaidh e am buidheann 3′P a thoirt air falbh ann an DNA agus am buidheann 5′OH a fhosfaireachadh rè càradh DSB. Tha e cuideachd a’ toirt a-steach càradh briseadh aon-shreath (SSBn) a’ cleachdadh slighe càraidh SSB (Chatterjee et al., 2015). Tha kinase pròtain DNA-PKcs na kinase pròtain an urra ri DNA a tha air a dhèanamh suas de fho-aonad catalaíseach de theaghlach PIKKn (kinases co-cheangailte ri phosphatidylinositol 3-kinase) agus ataxia telangiectasia mutated (ATM), a bharrachd air ATM agus ATRn co-cheangailte ri Rad3. briseadh-shreath (DSBn) agus briseadh aon-shreath (Yue et al., 2020; Peng et al., 2016).
Tha HDR na dhòigh-obrach càraidh nas cruinne agus nas freagarraiche leis gu bheil am fiosrachadh air a chopaigeadh le bhith a’ cleachdadh cruth slàn an duplex DNA homologous, ged a dh’ fheumas e làthaireachd chromatids piuthar. Tha seo a’ tachairt aig ìre S/G2 de chearcall cealla mamalan. Tha HDR a’ tachairt sa mhòr-chuid ann an gnèithean beirm, ach tha NHEJ deatamach ann am mamalan (Burma et al., 2006; Abbasi et al., 2021). Tha an dòigh-obrach càraidh iomlan air a shealltainn ann am Figear 1.
Leis gu bheil TNBC air adhbhrachadh le ana-cainnt ginteil agus epigenetic, is dòcha gur e dòigh-obrach reusanta leigheasach a th’ ann a bhith a’ ceartachadh ana-cainnt genomic/epigenomic malignant a’ cleachdadh CRISPR/Cas9 (Chen et al., 2019). A bharrachd air an sin, is dòcha gum bi feartan sònraichte cheallan aillse aig cuid de na factaran tar-sgrìobhaidh a tha an sàs ann an riaghladh tar-sgrìobhaidh sònraichte do cheallan, a’ moladh gum faodadh riaghladh tar-sgrìobhaidh a bhith na dhòigh-obrach sàr-mhath airson làimhseachadh aillse (Drost et al., 2017). Faodaidh cleachdadh nan feartan moileciuil seo de tumhair, leithid easbhaidhean ginteil, epigenetic agus tar-sgrìobhaidh, airson leasachadh dhrogaichean toraidhean clionaigeach a leasachadh agus cosgaisean sgrìonaidh a lughdachadh. Tha CRISPR na inneal deasachaidh gine a dh’ fhaodadh a bhith ann nach urrainn a-mhàin targaidean genomic a dh’ adhbhraicheas aillse a lorg agus a chomharrachadh, ach a dh’ fhaodar a chleachdadh cuideachd gus oncogenes ann an ceallan daonna a dheasachadh, a chumail fodha agus atharrachadh gu epigenetic (Clàr 1) (Ahmed et al., 2021). Chaidh grunn sgrìonaidhean CRISPR a dhèanamh gus coimhead airson ginean co-cheangailte ri luchd-bacadh tumhair, oncogenes, agus strì an aghaidh dhrogaichean. Tha cleachdadh CRISPR/Cas9 gus diofar oncogenes TNBC a dheasachadh air a shealltainn ann am Figear 2.
Figear 2. Deasachadh gine air diofar oncogenes TNBC a’ cleachdadh CRISPR/Cas9 a’ leantainn gu lùghdachadh ann am fàs tumhair agus metastasis. Tha na h-oncogenes sin a’ toirt a-steach CDK7, NAT1, UBR5, YTHDF2, ITGA9, CXCR4 agus CXCR7, Crypto1, ROR1 agus ST8SIA, a tha an sàs ann an tachairt agus metastasis TNBC.
Tha imrich cheallan aillse, ionnsaigh, agus gluasad epithelial-mesenchymal (EMT) co-cheangailte ri ITGA9. Tha sgrùdaidhean roimhe air sealltainn gu bheil ITGA9 na phrìomh chluicheadair ann an slighe Notch agus gu bheil pàirt inntinneach aige ann am metastasis rhabdomyosarcoma (Molist et al., 2020). A bharrachd air an sin, chaidh a lorg gu bheil ITGA9 ceangailte gu dlùth ri prognosis euslaintich ann an grunn sheòrsaichean tumhair, a’ gabhail a-steach aillse broilleach (Wang Z. et al., 2019). A bharrachd air an sin, sheall mion-sgrùdadh bith-fhiosrachaidh air ITGA9 gu robh an abairt aige ann an TNBC gu math nas àirde na ann an fo-sheòrsan aillse broilleach eile. Tha ìrean ITGA9 àrdaichte co-cheangailte ri metastasis tumhair agus ath-chraoladh ann an euslaintich TNBC. Mar thoradh air cuir às do ITGA9 le CRISPR / Cas9, nochd feartan coltach ri ceallan gas aillse (CSC), angiogenesis tumhair, fàs tumhair, agus lùghdachadh metastasis le bhith a’ brosnachadh lobhadh β-catenin ann an TNBC (Wang Z. et al., 2019).
Tha Crypto-1 na bhall de theaghlach TGF-β agus tha e deatamach airson embryogenesis tràth, cumail suas ceallan gas, agus metastasis aillse (Ishii et al., 2021). Ris an canar cuideachd Tdgf-1, tha e na phròtain comharran oncogenic stèidhichte air GPI a tha an sàs ann an riaghladh cruthachadh an t-sreath phrìomhadail, mesoderm agus endoderm, a bharrachd air stèidheachadh neo-chothromachd clì / deas ann an leasachadh buill-bodhaig rè embryogenesis (Zhang et al., 2021b). A bharrachd air an sin, chaidh a shealltainn gu bheil Cripto-1 an sàs ann an gluasad epithelial-mesenchymal (EMT) mar chomharradh ceallan gas (Zhang et al., 2021b). Tha EMT deatamach chan ann a-mhàin airson diofar phròiseasan leithid leasachadh embryonic, fibrosis agus slànachadh lotan, ach cuideachd airson ionnsaigh aillse agus metastasis. A bharrachd air an sin, chaidh a shealltainn gu bheil Cripto-1 ag eadar-obrachadh le ceithir gabhadairean Notch agus a’ neartachadh an aibidh iar-eadar-theangachaidh (Brandstadter agus Maillard, 2019). Tha fios gu bheil slighe chomharran Notch an sàs ann a bhith a’ cumail suas ceallan aillse broilleach daonna. Tha sgrùdaidhean air sealltainn gu bheil cuir às do Crypto-1 le CRISPR/Cas9 a’ cur bacadh air fàs agus metastasis aillse. Mar sin, dh’ fhaodadh Crypto-1 a bhith na thargaid leigheasach chudromach airson TNBC (Castro et al., 2015).
Tha pròtain XCL12 agus an gabhadair chemokine CXC aige (CXCR4 agus CXCR7) a’ cluich diofar dhleastanasan ann am iomadachadh, fàs, imrich agus ionnsaigh cheallan aillse (Wu et al., 2015). Tha na gabhadairean chemo seo air a bhith co-cheangailte ri leasachadh TNBC tro iomadh slighe chomharran ann am modalan in vivo agus in vitro (Wu et al., 2015). A bharrachd air an sin, tha gnìomhachadh CXCR4 agus CXCR7 co-cheangailte ri barrachd so-leòntachd do metastasis agus droch ro-innse ann an TNBC (Karn et al., 2022). Mar sin, dh’ fhaodadh gun tèid CXCR4 agus CXCR7 a bhualadh a-mach gu bhith nan ginean targaid dhrogaichean èifeachdach airson làimhseachadh aillse broilleach, a’ gabhail a-steach TNBC. Sgrùdadh le Yang et al. Chleachd Yang et al (2019) CRISPR / Cas9 gus na ginean CXCR4 agus CXCR7 a cho-bhualadh agus lorg iad gun deach iomadachadh, fàs, imrich agus ionnsaigh TNBC a bhacadh gu mòr (Yang et al., 2019).
Chaidh ìrean nas àirde de miR-3662, oncogene TNBC, fhaicinn ann am figheagan aillse broilleach (Yi et al., 2022). Chaidh sealltainn gu bheil lùghdachadh miR-3662 a’ cur bacadh air fàs tumhair aillse broilleach agus metastasis an dà chuid in vivo agus in vitro (Agarwal agus Gupta, 2021). Tha HBP-1 na bhacadh cumhachdach air comharran Wnt/-catenin agus tha e coltach gur esan a tha an urra ri fàs cheallan TNBC air a bhrosnachadh le miR-3662. O chionn ghoirid, lorg Yi et al. gu bheil an axis miR-3662-HBP1 a’ riaghladh slighe comharran Wnt/-catenin ann an ceallan TNBC (Yi et al., 2022). Air sgàth an abairt sònraichte don tumhair, is dòcha gur e miR-3662 targaid leigheasach a dh’fhaodadh a bhith ann airson TNBC. Mar sin, is dòcha gur e lùghdachadh miR-3662 air a bhrosnachadh le CRISPR/Cas9 dòigh-obrach sàr-mhath airson drogaichean ùra a leasachadh airson làimhseachadh TNBC.
'S e niùclasfosfoprotein 300 kDa a th' ann an UBR5 a chaidh a chomharrachadh mar phrìomh riaghlaiche air tumorigeneis, metastasis, agus freagairt dìonachd ann an diofar aillsean (Shearer et al., 2015; Fu et al., 2023). Chaidh aithris gu bheil UBR5 air a mheudachadh gu mòr ann an sampallan TNBC agus a’ brosnachadh gnìomh ERα le bhith ag adhbhrachadh iomadachadh tro ghnìomhachd ubiquitin ligase (Bolt et al., 2015). Sheall sgrùdaidhean sreath exome slàn de shampaill TNBC bun-sgoile cuideachd barrachd abairt de UBR5, a’ moladh a dhreuchd ann an leasachadh TNBC. A bharrachd air an sin, sheall cuir às do UBR5 air a stiùireadh le CRISPR / Cas9 casg mòr air metastasis agus fàs TNBC ann am modalan luchag deuchainneach. A bharrachd air an sin, thug toirt a-steach UBR5 ann am modail luchag seòrsa fiadhaich air ais a làn ghnìomhachd, ach cha deach a’ bhuaidh seo fhaicinn ann an sreathan mutant neo-ghnìomhach (Liao et al., 2017). Tha dìth UBR5 co-cheangailte ri barrachd apoptosis, necrosis, agus casg air fàs tumhair ann an TNBC air sgàth droch angiogenesis. Air sgàth call UBR5, tha sgaoileadh tumhair gu buill-bodhaig fad às air a lughdachadh, agus bidh UBR5 ag adhbhrachadh EMT neo-àbhaisteach sa mhòr-chuid le bhith a’ lughdachadh abairt E-cadherin (Zhang agus Weinberg, 2018). O chionn ghoirid, chaidh a shealltainn gu bheil UBR5 na fhactar glè chudromach ann an tar-sgrìobhadh PDL1 air a bhrosnachadh le IFN-γ ann an TNBC air sgàth dìth gnìomhachd ubiquitination E3. Nochd mion-sgrùdadh transcriptome RNA gum faodadh buaidhean siostamach a bhith aig UBR5 air ginean co-cheangailte ris an t-slighe IFN-γ agus a’ brosnachadh tar-ghnìomhachadh PDL1 le bhith ag àrdachadh ìrean gnìomhachaidh RNA kinase pròtain (PKR) agus na transducers comharran agus gnìomhaichean aige. tar-sgrìobhadh 1 (STAT1) agus factar riaghlaidh interferon 1 (IRF1). Ach, tha buaidh leigheasach sineirgisteach aig toirt air falbh UBR5 agus abairt PD-L1 le CRISPR/Cas9 na bha aig bacadh leotha fhèin, le buaidhean mòra air meanbh-àrainneachd an tumhair (Wu et al., 2022). Mar sin, is dòcha gur e CRISPR/Cas9 inneal cudromach airson gnìomh UBR5 a chasg, agus mar sin casg a chur air metastasis TNBC agus fàs tumhair.
'S e pròtain thar-membrane seòrsa I a th' ann an ROR1 a tha air a chur an cèill rè aillse agus leasachadh embryonach agus chaidh a chomharrachadh mar phròtain oncofetal (Nicholas Borcherding, 2014). Tha giùlan ionnsaigheach diofar aillsean daonna co-cheangailte ri àrdachadh ROR1. Chaidh toraidhean gealltanach fhaighinn bho sgrùdaidhean in vivo agus in vitro anns a bheil todhar leigheasach ag amas air ROR1 (Chien et al., 2016). Tha ìrean àrda de mRNA ROR1 ann am biopsies clò broilleach cuideachd air a bhith co-cheangailte ri tumhair broilleach coltach ri basal (BL) ionnsaigheach agus an imrich gu pàirtean eile den bhodhaig. A bharrachd air an sin, chaidh cus-chur an cèill ROR1 a chomharrachadh mar chomharradh prognosach airson leasachadh TNBC (Chien et al., 2016). Ach, bhiodh e na ro-innleachd èifeachdach ROR1 a shàmhlachadh a’ cleachdadh CRISPR / Cas9 gus fàs agus metastasis TNBC a chumail fodha.
Tha am pròiseas sialylation a’ toirt a-steach cur searbhag sialach ri glycoconjugates, a tha air a chatalachadh le sialyltransferases (STs). Buinidh ST8SIA1 don teaghlach ST agus tha pàirt chudromach aige ann am pathogenesis diofar ghalaran leithid leucemia lymphocytic agus aillse colorectal (Chang et al., 2018). Tha mion-sgrùdadh sreath RNA a’ sealltainn gu bheil ST8SIA1 air a chuir an cèill gu mòr ann am clò broilleach euslaintich TNBC agus gu bheil e co-cheangailte gu dearbhach ri mùthaidhean anns a’ ghine casg tumhair p53, a dh’ fhaodadh cur ri pathogenesis TNBC (Battula et al., 2017). A bharrachd air an sin, tha ST8SIA1 an sàs ann am metastasis agus ath-chuairteachadh TNBC, a’ moladh gu bheil pàirt chudromach aige ann an tachairt agus leasachadh TNBC. Ann am modail in vitro de TNBC, chaidh sealltainn gu bheil leagail ST8SIA1 le CRIPSR / Cas9 a’ cur bacadh air fàs agus metastasis (Battula et al., 2017). Tha seo a’ moladh gum faodadh CRISPR/Cas9 a bhith na inneal cudromach airson casg a chuir air gnìomhachd an oncogene ST8SIA1 ann an làimhseachadh TNBC.
'S e einnsein metabolach a th' ann an NAT1 a bhios a' catalachadh cruthachadh choimeasgaidhean xenobiotic ìre II agus tha e air a chur an cèill anns cha mhòr a h-uile clò daonna. Faodaidh NAT1 an cofactor folate a chleachdadh gus acetyl-CoA (acetyl-CoA) a thargaideadh eadhon ged nach eil an t-substrate amine aromatach ann (Stepp et al., 2015; Laurieri et al., 2014). Tha sgrùdaidhean air sealltainn gu bheil NAT1 a’ riaghladh gnìomh matrix metalloproteinase 9 (MMP9) ann am modalan cealla aillse broilleach agus a’ dìon an aghaidh gnèithean ocsaidean ath-ghnìomhach (ROS) rè gainnead glùcois (Wang et al., 2018). Chaidh a shealltainn gu bheil cuir às do NAT1 a’ cur bacadh air an iom-fhillte pyruvate dehydrogenase, ag adhbhrachadh mì-ghnìomhachd mitochondrial (Wang L. et al., 2019). A bharrachd air an sin, tha grunn aithisgean eile air sealltainn gum faod casg NAT1 a’ cleachdadh mholacilean beaga agus silencing siRNA ionnsaigheachd agus iomadachadh cheallan aillse broilleach a lughdachadh (Stepp et al., 2018). O chionn ghoirid, chaidh CRISPR/Cas9 a chleachdadh gus NAT1 a chumail fodha ann an loidhne cealla aillse broilleach MDA-MB-231, a’ toirt buaidh air metabolism ceallach a rèir an ìre abairteachd aige. Sheall an sgrùdadh seo cuideachd gu bheil NAT-1 deatamach airson adhartas agus metastasis TNBC (Carlisle et al., 2020).
Tha tar-sgrìobhadh co-òrdanaichte oncogenes air a riaghladh le super enhancers, factaran tar-sgrìobhaidh agus co-fhactaran (Hnisz et al., 2015). A bharrachd air an sin, tha feum air buidheann de kinases an urra ri cyclin (CDKn), leithid CDK7, CDK8, CDK9, CDK12, agus CDK13, airson riaghladh tar-sgrìobhaidh. Nam measg, tha CDK7 an sàs ann am fosfaireachadh RNA polymerase II, a tha glè chudromach airson tòiseachadh agus leudachadh tar-sgrìobhadh oncogene ann am pathogenesis TNBC. Ann an sgrùdadh cudromach, chuir cuir às do CDK7 le CRISPR / Cas9 bacadh air TNBC, a’ nochdadh gu bheil pathogenesis TNBC an urra ri CDK7 (Wang Y. et al., 2015).
Tha sgrùdaidhean air sealltainn gum faod mùthaidhean ann am MYC agus RBP (pròtain ceangailteach RNA) leantainn gu apoptosis, agus chan eil mùthaidhean gine singilte ann am MYC no RBP a’ toirt buaidh air fàs cheallan aillse (Einstein et al., 2021). Chaidh còrr air 1000 RBP anns a’ ghineam daonna a sgrìonadh a’ cleachdadh leabharlann stèidhichte air CRISPR / Cas9. Nam measg, chaidh 57 RBP a lorg deatamach airson fàs cheallan aillse le ìrean MYC àrdaichte (Wheeler et al., 2020). A bharrachd air an sin, tha YTHDF2 cudromach airson fàs cealla TNBC a chumail suas agus a’ lughdachadh na tha de thar-sgrìobhaidhean methylated rè tar-sgrìobhadh agus eadar-theangachadh àrd-ìre ann an ceallan aillse le abairt MYC nas àirde. A bharrachd air an sin, chan eil YTHDF2 riatanach airson ceallan aillse, a tha nas lugha an urra ri ìrean MYC àrdaichte gus mairsinneachd euslaintich TNBC a leudachadh (Einstein et al., 2021), a’ moladh gum faodadh e a bhith na thargaid leigheasach a dh’ fhaodadh a bhith ann airson drogaichean as urrainn faighinn thairis air TNBC.
Tha pròtainean meòir sinc (ZNFs) a’ dèanamh suas timcheall air 1% de ghineamh iomlan an duine. Tha sgrùdaidhean air sealltainn gum faod ZNF iomadachadh cheallan a riaghladh ann an diofar aillsean, leithid aillse an grùthan, aillse broilleach agus aillse coloin is reicteim (Zhang W. et al., 2021; Li et al., 2017). Chaidh leabharlannan a chaidh a chruthachadh le CRISPR knockout a chleachdadh gus diofar ghinean casg tumhair (TSGs) a sgrìonadh ann an ceallan aillse broilleach (Shalem et al., 2014). Bho sin, tha sgrùdadh transcriptomic air ceallan aillse broilleach air an deach ZNF319 a dhubhadh às le CRISPR/Cas9 air sealltainn gur e gine casg tumhair a th’ ann an ZNF319 a lughdaicheas iomadachadh aillse broilleach agus mar sin tha e an sàs ann an grunn dhòighean comharran a dh’fhaodadh a bhith ann agus gnìomhan bith-eòlasach eile (Wang L. et al., 2022).
'S e seòrsa de bhàs cealla prògramaichte a th' ann am ferroptosis a tha an urra ri làthaireachd iarainn. Tha fios gu bheil buaidh aig làthaireachd peroxides lipid air leasachadh ferroptosis. A bharrachd air an sin, chaidh aithris gu bheil PKCβII a’ nochdadh peroxidation lipid tràth, agus tha barrachd peroxidation lipid co-cheangailte ri ferroptosis. Nochd sgrìonadh leabharlann de luchd-bacadh kinase air an adhbhrachadh le CRISPR / Cas9 gu bheil PKCβII an sàs ann am pròiseas peroxidation lipid, a tha deatamach airson ferroptosis ann an ceallan MDA-MB-231 (Zhang et al., 2022). Mar sin, tha seo a’ moladh gum faodadh cnagadh a-mach PKCβII le CRISPR / Cas9 a bhith na thargaid gine casg tumhair a dh’ fhaodadh a bhith ann airson làimhseachadh ghalaran co-cheangailte ri ferroptosis (Zhang et al., 2022).
Thathas a’ creidsinn gur e strì an aghaidh dhrogaichean a tha cunntachail airson timcheall air 90% de bhàsan ann an euslaintich aillse agus gur e seo aon de na prìomh dhùbhlain ann an làimhseachadh aillse (Bukowski et al., 2020). Tha na toraidhean a’ nochdadh gu bheil àireamh gu leòr de ghinean co-cheangailte ri sruthadh dhrogaichean, càradh DNA, apoptosis agus diofar shlighean comharran cealla co-cheangailte ri strì an aghaidh dhrogaichean (Haider et al., 2020). Nam measg, tha grunn ghinean air an targaideadh le innealan CRISPR / Cas9 agus tha iad air toraidhean gealltanach a nochdadh ann a bhith a’ lughdachadh strì an aghaidh dhrogaichean agus ag àrdachadh èifeachdas leigheasan an-aghaidh aillse (Vaghari-Tabari et al., 2022). A bharrachd air an sin, tha leabharlannan sgrìonaidh cnagadh a-mach gine CRISPR / Cas9 àrd-toraidh air a bhith ceangailte ri bhith ag atharrachadh gnìomh thargaidean gine strì an aghaidh dhrogaichean a dh’ fhaodadh a bhith ann (Shalem et al., 2015). Gus ginean strì an aghaidh paclitaxel a chomharrachadh, chaidh sreathan RNA còmhla ri sgrìonadh leabharlann sgRNA air feadh a’ ghineim a chleachdadh gus ochd ginean tagraiche a chomharrachadh, nam measg histone deacetylase 9 (HDAC9), a tha co-cheangailte ri strì an aghaidh dhrogaichean ann an euslaintich le TNBC ath-chuairteach (B et al., 2020). Ann an sgrùdadh eile, chaidh barrachd abairt de diserine/threonine agus tyrosine protein kinase (DSTYK) fhaicinn rè mairsinn euslaintich TNBC a chaidh a làimhseachadh le drogaichean an-aghaidh aillse. A bharrachd air an sin, mheudaich bualadh sìos DSTYK le CRISPR/Cas9 apoptosis cheallan aillse a tha an aghaidh dhrogaichean gu mòr in vitro (ceallan SUM102PT agus ceallan MDA-MB-468) agus modail TNBC in vivo (Ogbu et al., 2021).
Ged a tha gnìomhachd neo-àbhaisteach air slighe MAPK aig TNBC, tha buaidh chliniceach leigheasan a tha ag amas air MEK bochd. Nochd sgrìonadh leabharlann genomic CRISPR/Cas9 gu bheil casg air PSMG2 (chaperone cruinneachadh proteome 2) a’ dèanamh ceallan TNBC BT549 agus MB468 nas mothachaile don inhibitor MEK AZD6244. Dh’atharraich lùghdachadh CRISPR/Cas9 de PSMG2 gnìomh àbhaisteach proteasome, ag adhbhrachadh dì-chruinneachadh PDPK1 le meadhan autophagy, agus mar sin a’ leasachadh ceallan tumhair ann am modalan luchaige TNBC air an adhbhrachadh le AZD6244 (inhibitor MEK) agus MG132 (inhibitor proteasome). Mar sin, faodar luchd-bacadh proteasome agus MAP kinase (MEK) a thoirt seachad gu co-obrachail gus iomadachadh cheallan tumhair a lughdachadh (Wang X. et al., 2022).
Chaidh CRISPR/Cas9 a chleachdadh cuideachd gus sgrìonadh a dhèanamh airson call gnìomh gine a’ leantainn gu strì an aghaidh TNBC (Shu et al., 2020). Mhìnich Ge et al. meacanaig strì an aghaidh dhrogaichean ann an ceallan aillse air an làimhseachadh le JQ1, casg bromodomain BET (BBDI), ann an TNBC. A’ cleachdadh CRISPR/Cas9, fhuair iad a-mach gun tug cuir às don ghine rb1 air TNBC fàs dìonach an aghaidh an druga an-aghaidh aillse JQ1. Mar sin, tha gnìomh rb1 cudromach anns an fhreagairt do dhrogaichean JQ1 ann an TNBC. Dh’innis iad cuideachd gur e casg kinase/microtubule CDK4/6 a th’ ann am paclitaxel, agus gum faodadh a mheasgachadh le BBDIn leithid JQ1 freagairtean leigheasach gealltanach a thoirt do TNBC a tha an aghaidh dhrogaichean (Ge et al., 2020).
Chaidh aithris gu bheil cruth-tìre tar-sgrìobhaidh RNA fada neo-chòdaidh (lncRNA) an urra ri strì an aghaidh leigheas neoadjuvant ann an TNBC. Tha an sgrùdadh seo a’ sealltainn gu bheil còig tar-sgrìobhaidhean lncRNA MALAT1 eadar-dhealaichte air an cur an cèill gu mòr ann an TNBC. A bharrachd air an sin, mheudaich cuir às do MALAT1 le CRISPR / Cas9 cugallachd cheallan TNBC BT-549 gu paclitaxel agus doxorubicin, a’ moladh dreuchd a dh’ fhaodadh a bhith aig strì an aghaidh MALAT1 ann an TNBC (Shaath et al., 2021).
Tha mùthaidhean ann am BRCA1 (BRCA1m) neo-aonghnèitheach agus mar sin duilich an lorg. Dh’ fhaodadh gum bi cugallachd dhrogaichean TNBC air a mheudachadh le bhith ag amas air PARP1 (poly(ADP-ribose) polymerase), am com-pàirtiche marbhtach synthetigeach aig BRCA1. Le bhith a’ cleachdadh CRISPR/Cas9, mheudaich cuir às do PARP1 cugallachd dhrogaichean an-aghaidh aillse leithid doxorubicin, gemcitabine agus docetaxel do cheallan TNBC mutant mBRCA1, a’ moladh gu bheil PARP1 cuideachd an sàs ann an strì an aghaidh dhrogaichean ann an TNBC (Vaghari-Tabari et al., 2022). Tha fios gu bheil mùthaidhean anns na ginean casg tumhair BRCA1 no BRCA2 ag àrdachadh an coltachd gum bi aillse broilleach air a leasachadh ann an daoine. Feumaidh làimhseachadh nan euslaintich sin luchd-bacadh PARP a chleachdadh. A bharrachd air an sin, chaidh a dhearbhadh gun urrainn do bhualadh a-mach am factar teasairginn nucleotide DNPH1 le bhith a’ cleachdadh CRISPR/Cas9 an nucleotide puinnseanta 5-hydroxymethyldeoxyuridine (hmdU) monophosphate a thoirt air falbh, agus mar sin a’ neartachadh freagairt cheallan aig a bheil gainnead BRCA ri cugallachd do luchd-bacadh PARP (Fugger). et al., 2021). Mar sin, dh’ fhaodadh luchd-bacadh CRISPR/Cas9 agus PARP1 a bhith nan ro-innleachd làimhseachaidh chudromach airson TNBC.
'S e gine strì an aghaidh ioma-dhrogaichean a th' anns a' ghine glycoprotein treòrachail (P-gp) a tha mar as trice air a mheudachadh ann an timcheall air 41% de TNBC uile (Sun et al., 2020). Chaidh sruthadh dhrogaichean air adhbhrachadh le P-gp a chomharrachadh mar phrìomh riaghlaiche air strì an aghaidh dhrogaichean ann an aillse broilleach. Tha luchd-bacadh P-gp air barrachd cugallachd a nochdadh do dhrogaichean an-aghaidh aillse ann an aillse broilleach (Famta et al., 2021). Mar sin, is dòcha gur e toirt air falbh no casg P-gp agus luchd-bacadh P-gp le CRISPR / Cas9 dòighean glè chudromach airson faighinn thairis air strì an aghaidh dhrogaichean ann an TNBC.
Tha fios gu bheil an giùlan cassette ceangailteach ATP G2 (ABCG2) ag adhbhrachadh strì an aghaidh dhrogaichean ann an TNBC (Palasuberniam et al., 2015), ged nach eil aithisgean sam bith ann an-dràsta air a’ cheangal eadar CRISPR/Cas9 agus ABCG2 a’ cuir às do ghnìomhachd gine casg tumhair. Dh’ fhaodadh PTEN gnìomhachd ABCG2 a neartachadh (Palasuberniam et al., 2015), (Deepak Singh et al., 2021). Mar sin, dh’ fhaodadh gum bi cleachdadh CRISP/Ca9 gus ABCG2 a thoirt air falbh agus a chur còmhla ri casg-bhacadh ABCG2 na làimhseachadh iomchaidh gus faighinn thairis air strì an aghaidh dhrogaichean ann an TNBC. Tha Clàr 2 a’ toirt iomradh air CRISPR/Cas9 ag amas air a h-uile gine strì.
Clàr 2. Bidh CRISPR/Cas9 ag amas air diofar ghinean strì an aghaidh TNBC gus ceallan a dhèanamh mothachail air drogaichean an-aghaidh aillse.
Tha leabharlannan CRISPR/Cas9 nan innealan comasach airson sgrìonadh a dhèanamh air mùthaidhean gine co-cheangailte ri pathogenesis aillse (Chan et al., 2022). Tha ceithir ceumannan anns an dòigh sgrìonaidh seo leithid (a) togail leabharlainn, (b) tar-chur lentiviral, (c) sgrìonadh fenotypic, agus (d) mion-sgrùdadh gine targaid. Ged a tha gnìomhachd neo-àbhaisteach air slighe MAPK aig TNBC, tha ro-shealladh clionaigeach leigheas targaideach MEK airson euslaintich TNBC aig a bheil mùthaidhean ann an ginean casg tumhair leithid PTEN, RB1, agus TP53 gu math bochd.
A bharrachd air an sin, rinn sgrìonadh cnagadh gine a’ cleachdadh CRISPR/Cas9 deuchainn air a’ mholaciul as cumhachdaiche agus as roghnacha, dehydrocatrol, a tha pailt ann an earrannan fhlùraichean is dhuilleagan Guatemalanach, gus tuigse fhaighinn air buaidh dehydrocatrol air MDA-MB-231. Dòighean-obrach cito-tocsaineachd cealla roghnach. Feartan gas mesenchymal de fho-sheòrsan TNBC. Nochd an sgrìonadh stèidhichte air CRISPR/Cas9 seo cuideachd gu bheil HSD17B11, gine a tha a’ còdachadh 17β-hydroxysteroid dehydrogenase seòrsa 11, air a chuir an cèill gu mòr ann an ceallan MDA-MB-231 agus a’ leantainn gu dehydrofalcarinol sònraichte airson ceallan MDA-MB-231 (Grant et. al., 2020). Mar sin, tha seo a’ moladh gu bheil comas mòr aig sgrìonadh genomic CRISPR/Cas9 ann a bhith a’ comharrachadh nam dòighean-obrach a tha aig bonn fheartan an-aghaidh aillse choimeasgaidhean nàdarra a dh’fhaodadh a bhith ann.
A bharrachd air an sin, chaidh so-leòntachd TNBC do aillse a sgrùdadh le bhith a’ cleachdadh sgrìonadh CRISPR/Cas9 in vivo neo-chlaon air feadh an genome, a sheall ceangal eadar slighean oncogenic agus slighean casg tumhair. Chaidh aithris gu bheil prìomh phàirtean de na slighean mTOR agus Hippo a’ cluich phàirtean cudromach ann an riaghladh tumhair ann an TNBC. A bharrachd air an sin, tha sgrùdaidhean air sealltainn gu bheil casg cungaidh-leigheis air oncoprotein mTORC1/2 agus YAP a’ cur bacadh èifeachdach air pathogenity TNBC a’ cleachdadh modail synergy droga-matrix in vitro agus xenografts a thig bho euslaintich in vivo. A bharrachd air an sin, bidh casg mTORC1/2 air a bhrosnachadh le Torin-1 a’ neartachadh macropinocytosis, ach bidh casg YAP air a bhrosnachadh le verteporfin ag adhbhrachadh bàs cealla TNBC. Còmhla, tha na toraidhean seo a’ soilleireachadh cumhachd agus neart sgrìonadh CRISPR in vivo air feadh an genome gus leigheasan ùra is èifeachdach a chomharrachadh airson TNBC (Dai et al., 2021).
Tha mì-riaghladh an t-siostam dìon na fheart cudromach ann an cruthachadh tumhair. Bidh ceallan aillse a’ seachnadh glanadh dìonachd le bhith a’ seachnadh uidheaman dìon, a’ gabhail a-steach bacadh a chur air gnìomhachd cheallan dìonachd ann am meanbh-àrainneachd an tumhair agus a’ cur an siostam dìonachd ann an cunnart. Mar sin, is dòcha gur e leasachadh siostam dìonachd leasaichte dòigh-obrach chudromach airson sabaid an aghaidh tumhair. Bidh cleachdadh atharrachadh gine stèidhichte air CRISPR/Cas9 a’ dèiligeadh ri grunn chùisean co-cheangailte ri mì-ghnìomhachd dìonachd bho dhiofar sheallaidhean. Chaidh CRISPR/Cas9 a chleachdadh gus dìonachd an-aghaidh tumhair a leasachadh an aghaidh aillse broilleach tron t-slighe a leanas (Figear 3).
Figear 3. Bidh leigheas-dìona CRISPR/Cas9 ag amas air ceallan TNBC. Bidh call CDK5 agus leagail PDL1 agus CD155 a’ neartachadh an t-siostam dìon. San aon dòigh, mheudaich call A2AR agus leagail TAAn leithid HER2, mucin 1 agus TEM8 èifeachdas cheallan CAR-T ann a bhith a’ marbhadh cheallan aillse. Tha sgrìonadh cheallan-T air a stiùireadh le CRISPR/Cas9 air sealltainn gu bheil briseadh kinase p38 a’ neartachadh gnìomhachd an-aghaidh tumhair cheallan-T. Bidh ceallan-T air an atharrachadh le CRISPR/Cas9 ag àrdachadh abairt TCR (gabhadair cealla-T), agus mar thoradh air sin bidh gnìomhachd an-aghaidh tumhair aig ceallan-T.
Is e amas leigheas-dìona an siostam dìon a bhrosnachadh gus ionnsaigh a thoirt air ceallan aillse. Mar as trice bidh cus-chur phròtainean puing-sgrùdaidh dìon a’ cur casg air ath-bhualaidhean fèin-dìon ach dh’ fhaodadh e cuideachadh le cansearan an seachnadh (Topalian et al., 2015). Bidh na pròtainean seo a’ cur casg air ath-bhualaidhean dìon le bhith a’ ceangal ri gabhadan air uachdar cheallan dìon. Bidh grunn phròtainean puing-sgrùdaidh (leithid CD155 agus PD-L1) ag amas air gabhadair PD-1 air ceallan dìon agus tha iad air an cur an cèill ann an aillse broilleach, gu sònraichte TNBC (Li Y.-C. et al., 2020). Faodaidh lùghdachadh PD-L1 no an gabhadair aige a’ cleachdadh CRISPR/Cas9 an siostam dìon a bhrosnachadh gus ionnsaigh a thoirt air tumhair TNBC (Yahata et al., 2019). A bharrachd air an sin, chaidh sealltainn gu bheil lùghdachadh abairt PD-L1 tro bhith a’ cuir às do CDK5 le CRISPR/Cas9 a’ cur bacadh air fàs tumhair in vitro agus in vivo (Deng et al., 2020). Tha casg fàis ann am modalan in vitro agus in vivo de aillse broilleach a’ moladh gum faodadh buaidh leigheasach a bhith aig lùghdachadh CD155 le shRNA air aillse broilleach (Gao et al., 2018).
Bidh ceallan-T CAR a’ cur an cèill CARan a dh’aithnicheas antigens co-cheangailte ri tumhair (TAAn) agus as urrainn dhaibh pròtainean puing-sgrùdaidh a chleachdadh gus an gnìomhachd a neartachadh (Li C. et al., 2020). Tha grunn thargaidean comasach ann airson leigheas ceallan-T CAR ann an aillse broilleach, nam measg grunn TAn leithid HER2, mucin1, agus TEM8 (Bajgain et al., 2018). Tha fianais ann gu bheil ceallan-T CAR a tha ag amas air mesothelin (air a chur an cèill gu mòr ann an ceallan TNBC BT-459) nas èifeachdaiche an aghaidh aillse nuair a thèid PD-1 a bhualadh a-mach a’ cleachdadh CRISPR/Cas9 (Hu et al., 2019). Ach, tha a bhith a’ dealachadh cheallan-T bho euslaintich agus an uairsin gan deasachadh ex vivo na phròiseas saothair-dian agus a bheir ùine mhòr. Ged a dh’ fhaodas ceallan-T uile-choitcheann riatanasan aonaranachd a lughdachadh, bu chòir ceallan-T tabhartais a tha a’ cur an cèill antigen leukocyte daonna (HLA) clas I agus gabhadair cealla-T (TCR) a thoirt air falbh gus casg a chuir air ana-cainnt graft-versus-host (Ren et al., 2017, 2017a). Le bhith a’ cleachdadh CRISPR/Cas9, faodaidh HDR TCR agus HLA a thoirt air falbh aig an aon àm agus an gine a tha a’ còdachadh CAR a sgrios. Tha sgrùdaidhean air sealltainn gun gabh CRISPR/Cas9 a chleachdadh gus CARan an-aghaidh CD19 a thoirt a-steach don locus TCR, agus mar sin a’ dèanamh CARan gu h-èifeachdach gun cheallan T a lughdachadh (Dimitri et al., 2022). Chaidh teicneòlasan ioma-fhillte a leasachadh gus ceallan T CAR allogeneic a chruthachadh le bhith a’ toirt air falbh TCR, beta-2-microglobulin (B2M), fo-aonad HLA-I agus pròtainean eile leithid PD-1 agus CTLA-4 aig an aon àm, a dh’ fhaodadh a bhith nas fheàrr an-aghaidh aillse an-aghaidh TNBC (Eyquem et al., 2017; Liu et al., 2017; Ren et al., 2017b; Dimitri et al., 2022).
Dh’fhaodadh cleachdadh CRISPR/Cas9 èifeachdas cheallan CAR-T a leasachadh. Tha fios gu bheil feartan dìonachd-bhacadh aig adenosine agus faodaidh e dìonachd an-aghaidh aillse a lughdachadh le bhith a’ cur bacadh air gnìomhachd cheallan T agus a’ gnìomhachadh gabhadairean adenosine A2A (A2AR) (Vigano et al., 2019). Le bhith a’ cur às do A2AR a’ cleachdadh CRISPR/Cas9, chaidh èifeachdas cheallan CAR-T in vivo a leasachadh gu mòr (Giuffrida et al., 2021). Tha fios gu bheil diofar fheartan fenotypic aig ceallan T leithid leudachadh ceallach, eadar-dhealachadh, cuideam oxidative agus cuideam genomic. Nochd sgrìonadh cheallan T stèidhichte air CRISPR/Cas9 briseadh air 25 kinases gabhadair cealla T eadar-dhealaichte. Nam measg, chaidh a shealltainn gu bheil cuir às do kinase p38 a’ neartachadh gnìomhachd an-aghaidh tumhair cheallan T, a’ nochdadh gur e kinase p38 prìomh riaghlaiche riaghladh cheallan CAR-T (Gurusamy et al., 2020).
Faodar ceallan-T atharrachadh gu ginteil le bhith a’ cleachdadh CRISPR/Cas9 gus TCRn a tha air an cur an cèill gu mòr a thoirt gu buil. Tha gluasad cheallan-T atharraichte gu ginteil gu euslaintich air gnìomhachd an-aghaidh aillse nas làidire a nochdadh na ceallan-T dùthchasach. Mar sin, faodaidh TCRn dùthchasach farpais ri TCRn atharraichte gu ginteil ann an euslaintich, agus dh’ fhaodadh seo buaidh a thoirt air comas leigheas-dìona aillse. Gus faighinn thairis air an duilgheadas seo, faodaidh cleachdadh CRISPR/Cas9 gus TCR-β dùthchasach a thoirt air falbh ann an ceallan a gheibh e agus an uairsin ceallan-T TCR-β a ghluasad gu euslaintich aillse freagairtean dìonach an-aghaidh aillse nas fheàrr a nochdadh gun fheum air farpais feise TCR dùthchasach (Fan et al. 2018). Mar sin, a bharrachd air ceallan-T atharraichte le CRISPR, tha TCRn mìle uair nas mothachaile air antigens tumhair na ceallan-T àbhaisteach air an tar-chur le TCR. A bharrachd air an sin, ann an diofar leucemias, tha ceallan-T atharraichte a chaidh a chruthachadh le γδ TCR+ CRISPR a’ nochdadh barrachd abairt de cheallan-T CD4+ agus CD8+ na gluasad TCR àbhaisteach (Legut et al., 2018). Mar sin, dh’ fhaodadh ceallan-T atharraichte a chaidh a chruthachadh le CRISPR/Cas9 a bhith nan dòigh èifeachdach airson immunotherapy gus faighinn thairis air TNBC.
Is e moileciuilean greamachaidh cealla a th’ ann an integrins a tha an làthair ann an transmembranes ceallach agus a bhrosnaicheas ceangal cheallan ris a’ mhaitrics eadar-cheallach (ECM) (Hamidi agus Ivaska, 2018). Tha mì-riaghladh integrins co-cheangailte ri leasachadh agus imrich aillse le bhith ag atharrachadh a’ mhaitrics eadar-cheallach, a’ leantainn gu mairsinn ceallan aillse anns a’ chuairteachadh (Hamidi agus Ivaska, 2018). Bidh leagail integrin le CRISPR / Cas9 a’ slaodadh adhartas tumhair, metastasis, agus coloineachadh ann an TNBC. Chaidh aithris gu bheil leagail integrin a5 (ITGA5) a’ lughdachadh imrich agus adhartas cealla ann an aillsean eile leithid aillse sgamhain (Ju et al., 2017), a’ moladh gum faodadh integrin a5 a bhith na phrìomh fheart ann am pathogenesis TNBC cuideachd.
Tha gineadh luchagan cnagadh-a-mach a’ cleachdadh dhòighean traidiseanta cealla gas embryonic (ES) na phròiseas saothair-dian, ùine-ghoirteil, agus neo-èifeachdach. Bheir e mìosan is bliadhnaichean gus ceallan ES a thargaideadh tro ath-mheasgachadh homologous, luchagan chimeric a briodadh, agus an uairsin an crois-ghèilleadh le luchagan heterozygous gus sliochd homozygous a thoirt gu buil. Feumar crois-ghèilleadh iom-fhillte gus luchagan le iomadh mùthadh ginteil a chruthachadh. Ach, tha mòran dhuilgheadasan air èirigh nuair a thathar a’ cleachdadh luchagan a chaidh a chruthachadh le bhith a’ toirt air falbh ceallan ES a’ cleachdadh CRISPR/Cas9 no le bhith a’ microinjecting phàirtean CRISPR/Cas9 ann an uighean torrach aon-chealla. Mar eisimpleir, bidh toirt a-steach atharrachaidhean gu tric a’ tachairt aig loci dà-allelic agus chan eil e sònraichte do ghinean. Chaidh aithris o chionn ghoirid gum faod ceallan ES a’ cleachdadh teicneòlas CRISPR/Cas9 mùthaidhean dà-allelic a chuir a-steach aig an aon àm ann an suas ri 5 ginean (Nishizono et al., 2021). Airson an adhbhair seo, chaidh mRNA Cas9 agus còig gRNA sònraichte do ghinean a thar-chur aig an aon àm a-steach do cheallan ES. Tha seo a’ cur cuideam air gealladh agus èifeachdas a’ mhodh-obrachaidh seo, ged a dh’ fhaodadh na mùthaidhean sin a bhith air an toirt seachad nuair a chaidh loidhnichean stèidheachaidh a briodadh gus luchagan còig-fhillte “knockout” a thoirt gu buil. Tha an sgrùdadh cuideachd ag aithris lorg iongantach: chan eil feum air ceallan ES tuilleadh gus luchagan atharraichte gu ginteil a chruthachadh. An àite sin, gus toraidhean gine sònraichte a thoirt air falbh, chaidh mRNA agus gRNA Cas9 a stealladh a-steach do embryos ìre aon-chealla. Mar thoradh air an sin, chaidh loidhnichean stèidheachaidh “knockout” a chruthachadh a dh’ fhaodar a chleachdadh gu teòiridheach gus sgrùdadh a dhèanamh air builean cuir às do ghinean ann an luchagan (Qin et al., 2016). Mar sin, leigidh CRISPR/Cas9 le luchagan tar-ghinealach a chruthachadh gus TNBC a làimhseachadh aig cosgais nas ìsle na innleadaireachd ginteil traidiseanta. A’ cleachdadh an t-siostam CRISPR/Cas, chaidh modail ùr luchag “knockout” a leasachadh as urrainn mùthaidhean puing a thoirt a-steach gu soirbheachail ann an aon no barrachd ghinean dùthchasach ann an TNBC. Stèidhichte air a’ bhun-bheachd seo, faodar modalan bheathaichean de TNBC a leasachadh cuideachd a’ cleachdadh cuir às do BRCA1 agus p53 le CRISPR / Cas9, agus mar thoradh air sin bidh call càradh HR, neo-sheasmhachd genomic, agus phenotypes mutant (Annunziato et al., 2020).
An-dràsta, thathas a’ cleachdadh diofar dhòighean leithid mamografaireachd, ìomhaighean ath-shonnrachaidh magnetach (MRI) agus ultrasound gus TNBC a dhearbhadh. Ach, tha cuid de chuingealachaidhean aig na dòighean sin. Bithear a’ cleachdadh mamografaireachd gus clò broilleach ionadail a dhearbhadh seach metastases, far a bheil ceallan aillse air imrich gu buill-bodhaig eile. Chan e dòigh earbsach a th’ ann an ultrasonography airson TNBC a dhearbhadh (Chen agus Lee-Felker, 2023). Tha cugallachd nas àirde aig MRI na ultrasound agus mamografaireachd, ach tha a chruinneas breithneachaidh cuibhrichte (Sha agus Chen, 2022). Tha biopsy clò na dhòigh ionnsaigheach airson ceallan aillse aithneachadh. Ach, ann an cuid de chùisean, faodaidh biopsy clò aillseach a chall ma thèid an t-snàthad air falbh bhon raon ùidh. A bharrachd air an sin, tha e gu math daor agus faodaidh e a bhith uamhasach don euslainteach. Tha TNBC na sheòrsa eadar-dhealaichte de aillse, agus mar sin is dòcha nach toir biopsy fiosrachadh gu leòr mun t-seòrsa aillse. Mar sin, tha feum èiginneach air dòigh ùr earbsach a thaobh breithneachaidh airson TNBC a lorg. Faodaidh CRISPR / Cas9 a bhith na roghainn eile gu math mothachail agus le glè bheag de ionnsaigh airson aillse broilleach a dhearbhadh. Gus seo a dhèanamh, faodar ro-innleachdan stèidhichte air CRISPR/Cas9 a chleachdadh gus dòighean PCR a leasachadh airson breithneachadh TNBC. An toiseach, thathas a’ cleachdadh pròtainean Cas9 agus cpf1 siostam CRISPR gus DNA neo-shònraichte a thoirt air falbh, agus an uairsin faodaidh an dà phròtain seo (Cas9 agus cpf1) an t-sreath PAM aithneachadh mus ceangail iad ris an DNA targaid (Deepak Singh et al., 2021). Mar sin, faodaidh PCR mùthaidhean co-cheangailte ri leasachadh aillse a chomharrachadh. Tha grunn sgrùdaidhean air an ro-innleachd stèidhichte air CRISPR seo a ghabhail os làimh gus diofar mùthaidhean a lorg ann an diofar aillsean (Safari et al., 2019). Mar sin, faodaidh dòighean PCR stèidhichte air CRISPR lughdachadh a dhèanamh air eisimeileachd breithneachadh TNBC air dòighean ionnsaigheach leithid immunohistochemistry stèidhichte air biopsy.
Chaidh atharrachaidhean genotypach ann an riaghladh gabhadair hormona a nochdadh ann an TNBC cuideachd (Chen agus Russo, 2009). Faodaidh ro-innleachdan PCR stèidhichte air CRISPR / Cas9 a’ cleachdadh microarrays airson breithneachadh puing-cùraim sùil a chumail gu h-èifeachdach air na mùthaidhean sin (Hajian et al., 2019). Dh’ fhaodadh e cuideachd fiosrachadh buntainneach a thoirt do sholaraichean cùram slàinte mu mhùthaidhean sònraichte ann an euslaintich TNBC, a dh’ fhaodadh an cùrsa làimhseachaidh aca a leasachadh. Ach, tha crìochan aig an dòigh measgaichte seo. Mar sin, tha feum air oidhirpean rannsachaidh farsaing mus tèid an dòigh CRISPR / Cas-PCR seo a chleachdadh ann an cùram slàinte airson breithneachadh TNBC (Yang et al., 2019).
Àm puist: 14 Dàmhair 2024